Cad iad na modheolaíochtaí sintéise a úsáideann Biorunstar do shintéis peiptíde?
RE: Tá modheolaíochtaí sintéise céim réitigh éagsúla forbartha ag Biorunstar chun freastal ar riachtanais na gcustaiméirí. De ghnáth, cuirtear ceimic Fmoc céim soladach i bhfeidhm.
Conas a sheolann tú peptides? Cad iad na sonraí QC a chuirfear ar fáil?
RE: Seolfar gach peptides ag DHL nó FedEx express mar atá i bpúdar lyophilized i vials aonair dea-lipéadaithe, ag teocht an tseomra. Cé is moite de pheptídí amh, nach ndéanfar ach speictriméadracht MALDI-MASS a sheiceáil, tagann na peptidí íonaithe sintéiseacha go léir le tuarascáil tionscadail (CoA), sonraí MS agus sonraí HPLC. cuirfear bileoga sonraí ar fáil ina mbeidh na príomhthréithe, amhail seicheamh peiptíde, íonacht, cainníocht, modhnú, sonraí mais-speictrim agus sonraí HPLC.
Cad é an t-am slánúcháin tipiciúil do shintéis peptíde? Cé chomh fada a thógann sé a sheoladh chugam?
RE: Is é an t-am slánúcháin tipiciúil atá againn ná 2-3 seachtaine le haghaidh peptide caighdeánach faoi 30 aimínaigéid. Athraíonn an t-am slánúcháin ag brath ar fhad an pheptíde, cainníocht, tuaslagthacht agus deacracht. Go hiondúil 3-5 lá chun teagmháil a dhéanamh le taighdeoirí i dtíortha eile.
Cé chomh fada is féidir leat a shintéisiú?
RE: Tá taithí fhairsing ag Biorunstar maidir le peiptídí fada a shintéisiú, suas le 130aa. Murab ionann agus go leor soláthróirí peptide nach bhfuil ach compordach ag déanamh peptides faoi 30 nó 40aa, tá taithí mhaith ag Biorunstar maidir le peptídí a dhéanamh ó 40aa go 90aa. Tá sé deacair peptídí fada a shintéisiú, go háirithe 100aa nó níos faide. Má tá sé beartaithe agat seicheamh 130aa nó níos faide a shintéisiú, déan teagmháil linn le haghaidh sainráite próitéine saincheaptha agus seirbhís íonúcháin.
Cad a tharlaíonn má thagann roinnt fadhbanna chun cinn le linn an phróisis sintéise nó íonúcháin?
RE: Tá a saintréithe sonracha ag gach peptide. Má tharlaíonn roinnt fadhbanna le linn na sintéise thar ár n-ionchais, agus ní féidir linn do pheptíde a sheachadadh in am, cuirfimid in iúl duit chomh luath agus is féidir. De sheans nach bhfuil muid in ann an peptide a dhéanamh, ní ghearrfar aon chostais ort.
Foirm salainn TFA, foirm salainn Aicéatáit nó HCl: Cén fhoirm ba cheart dom a roghnú?
De réir réamhshocraithe, déantar peptides a shintéisiú i salann TFA. I gcás turgnaimh a bhaineann le cultúr cille nó fíocháin, ba cheart duit smaoineamh ar peptides a tháirgtear i bhfoirm salainn aicéatáit nó HCl ag 98% nó níos airde chun freagraí neamhghnácha a sheachaint. Is féidir foirm salainn aicéatáit nó HCl a iarraidh ar chostas breise.
Cad é seilfré peptide?
RE: Tá peptides cobhsaí ar feadh bliana ar a laghad má stóráiltear iad lyophilized sa reoiteoir. Má thuaslagtar peiptídí d'fhéadfaí an seilfré a laghdú. Má tá roinnt aimínaigéid imoibríocha sa pheptídí ar féidir iad a ocsaídiú mar Trp, Met ach go háirithe Cys, d'fhéadfaí an seilfré a laghdú freisin.
Tá roinnt cistéiní sa pheptíde agus mar sin féadann sé bannaí déshilfíde a fhoirmiú go héasca. Conas is féidir liom é seo a sheachaint?
RE: Má tá roinnt cistéiní, nó aimínaigéid imoibríocha eile, atá ocsaídithe go héasca sa seicheamh peptide, tairgeann Biorunstar an peptide a sheachadadh le rianta den DTT láidir reductant. Ní sheachadtar an peptide le DTT ach amháin má cheadaíonn an custaiméir é seo go sonrach.
Conas mo pheptídí sintéiseacha a stóráil?
RE: Beidh an chuid is mó peptídí lyophilized cobhsaí ag teocht an tseomra ar feadh 2-3 seachtaine. Le haghaidh stórála fadtéarmach, ba cheart duit peptídí lyophilized a stóráil ag -20 céim . Ba cheart timthriallta reo-leáite arís agus arís eile a sheachaint. Lig dó teacht go teocht an tseomra roimh oscailt. Tá seilfré na réitigh peptide teoranta; ba chóir tuaslagán peptide a úsáid a luaithe is féidir.
Cad é an íonacht don pheptíd amh agus don pheptíd díshaillte? Conas an peptide a íonú? Cad iad na neamhíonachtaí?
RE: I gcás peptídí gearr le gnáthsheichimh faoi 15aa, tá sé go ginearálta 40-60% de réir HPLC le haghaidh grád amh; 50-70% ag HPLC do ghrád díshaillte. Dá fhaide an peptide, is ísle an íonacht le haghaidh amhola nó díshaillte. Go ginearálta déantar peptides a íonú ag HPLC ag baint úsáide as uisce agus grádán aicéatóintríle. Is blúirí nó peiptídí scriosta iad an chuid is mó de na neamhíonachtaí, peptides neamh-chosanta neamhiomlán, agus salann agus uisce iarmharach.
Míniú ar Íonacht Peptide ag HPLC, Ábhar Peptide Iomlán agus Ábhar Peptide Sprioc.
RE: Longa Biorunstar peptides de réir ollmheáchan an phúdair lyophilized. Áirítear ar an púdar lyophilized neamhíonachtaí cosúil le blúirí nó peptides scriosadh, peptides dí-chosanta neamhiomlán, TFA agus uisce iarmharach. Déantar íonacht Peptide a thomhas ag HPLC. Is é an méid peptide ceart i gcoibhneas leis na hanailítí go léir a ionsú ag ~214 nm (súnn an banna peptide), scriosadh, teascadh nó seichimh neamh-chosanta go hiomlán, is dócha, etc. Ní chuireann íonacht peptide ag HPLC san áireamh uisce agus salainn. a bhíonn i láthair sa sampla de ghnáth. Is é Ábhar Peiptíde Iomlán ná céatadán na peptides iomlána atá i láthair i gcoibhneas le gach rud atá i láthair sa phúdar peptide lyophilized. Déantar ábhar peptide iomlán a chinneadh trí anailís ar ábhar nítrigine. Mar sin is féidir Ábhar Peiptíde Sprioc sa phúdar peiptíde lyophilized a thabhairt i gcrích leis an bhfoirmle: Ábhar Peptide Iomlán X Peptide Purity ag HPLC.
Cad é an modh lipéadaithe Fluorescein?
RE: Is é FITC (Fluorescein isothiocyanate) an réamhtheachtaí gníomhachtaithe a úsáidtear don lipéadú Fluorescein. Le haghaidh lipéadú éifeachtach Nterminal, aminohexaneyl seacht n-adamh
Cuirtear spásálaí (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) isteach idir an fluaraiféar (fluairoscein) agus an N-foirceann an pheptíde. Cuidíonn an spásaire seo leis an bhfluarafór a scaradh óna phointe ceangail, rud a d'fhéadfadh idirghníomhú an fhluarafór leis an mbithmhóilín dá bhfuil sé comhchuingeach a laghdú agus é a dhéanamh níos inrochtana d'imoibrithe braite tánaisteacha.
An féidir lipéadú C-críochfort a dhéanamh ar Biotin (nó FITC)?
RE: Tá. Déantar lipéadú C-críochfort ar Biotin (nó FITC) trí iarmhar Lysine a chur leis ag an gcríochfort C peptide, agus tá Biotin (nó FITC) ceangailte le slabhra taobh Lysine trí bhanna aimíde. Baintear lucht deimhneach Lysine.
Cad é an fad peptide cuí le haghaidh táirgeadh antasubstainte?
RE: Go ginearálta, moltar peptide iarmhar 10-25. D'fhéadfadh níos mó eipitipí a bheith ag peptide níos faide, ach d'fhéadfadh seans níos mó a bheith aige freisin struchtúir thánaisteacha cobhsaí a fhoirmiú nach foirmeacha dúchasacha iad. Peptíd níos giorra (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Cad is MAP ann?
RE: Is peptide brainseach é MAPS nó Peiptíd Il-Antaigineach ag a nasctar slabhraí peptide líneacha ag a gcuid C-críochfort trí chroí-pholailísín, rud a mhéadaíonn méid an mhóilín iomláin. Déantar é seo chun deireadh a chur le cúpláil na peptides go KLH. Dealraíonn sé, áfach, nach bhfuil comhfhoirmiú na peptides ar MAP chomh solúbtha, agus is gnách go n-aithníonn antasubstaintí a fhaigheann MAP spriocphróitéin chomh minic agus a aithníonn gnáth-réimniú KLH. Ina theannta sin, níl aon peptide saor in aisce a tháirgtear nuair a bhíonn MAPS á dhéanamh, rud a fhágann go bhfuil sé deacair antasubstaintí croí-threoraithe polylysine a bhaint. Tá sé deacair MAPS a íonú ag HPLC, agus soláthraítear MAPS gan fíorú mais mar gheall ar a ilchineálacht agus a mhéid móilíneach mór.
Cén fáth go bhfuil cuma scamallach ar mo thuaslagán peptíde comhchuingeach KLH?
RE: KLH nó Keyhole Limpéad Is próitéin comhiomlánaithe mór é hemocyanin (MW=4x105 – 1x107). Mar gheall ar a mhéid agus a struchtúr, tá a intuaslagthacht in uisce teoranta, rud a fhágann go bhfuil cuma scamallach air. Ní dhéanfaidh sé seo difear don imdhíon-ghineacht agus is féidir an tuaslagán mairtireach a úsáid le haghaidh imdhíonta.
An féidir leat na buaicphointí mais M+Na agus M+K i speictream MALDI a mhíniú?
RE: Tá sé an-choitianta adducts Na (sóidiam) agus K (potaisiam) a fheiceáil sa speictream MALDI. Tagann an sóidiam agus an potaisiam ón uisce a úsáidtear sna tuaslagóirí peptíde. Tá rianmhéid iain sóidiam agus photaisiam ag fiú uisce driogtha agus dí-ianaithe, nach féidir a bhaint go hiomlán go deo. Déantar iad seo a ianú le linn phróiseas maissonraithe MALDI agus ceanglaíonn siad le grúpaí saor-charbocsaileacha na peiptíde. Toisc nach bhfuil aon chóras íonú uisce ann a bhainfidh gach ian sóidiam nó potaisiam as uisce, tá sé an-choitianta agus dosheachanta i mais spec MALDI féachaint ar adduct sóidiam agus potaisiam ag amanna. Ní comhartha é seo nach bhfuil an peptide íon, agus níor chóir é a mheascadh le meáchan móilíneach mícheart.