Cad é Sintéis Peptide

 

Is réimse gníomhach é sintéis peptide sa cheimic próitéine agus peiptíde, a bhaineann go hiondúil le suimiú seicheamhach aimínaigéid in ord sainithe chun an slabhra peiptíde a fhoirmiú trí mhodhanna ceimiceacha. Is iad na príomh-mhodhanna sintéise sintéis chéim leachtach agus soladach-chéim. I gcomparáid le LPPS, tá na buntáistí ag SPPS a bheith níos tapúla, níos simplí, le níos lú frithghníomhartha taobh, agus táirgeacht níos airde.

 

Modh caighdeánach SPPS, lena n-áirítear straitéisí Boc (beinsile) agus Fmoc ( tBu ).

 

 

Boc ( beinsile ) straitéis

Sa chur chuige sintéise seo, úsáidtear roisíní polaistiréin Chloromethylated, hydroxymethylated agus p-methoxybenzyl (PMA) mar thacaí soladacha. Tá an -aimínghrúpa cosanta le t-butoxycarbonyl (Boc), agus tá grúpaí slabhra taobh d'aimínaigéid cosanta le díorthaigh beinsile. Baintear an grúpa Boc ag baint úsáide as TFA nó TFA néata i CH2Cl2, agus ag deireadh na sintéise, baintear grúpaí cosanta taobhshlabhra agus naisc roisín peptide le haigéad láidir cosúil le haigéad hidreafluarach ainhidriúil (HF) nó TFMSA.

 

Straitéis Fmoc ( tBu ).

Sa chur chuige sintéise seo, úsáidtear roisín Wang-roisín, 2-Roisín Clóiríd Chlorotritil, Roisín Rink aimíd-AM, Rink aimíde-MBHA mar thacaí soladacha.Tá an -aimínghrúpa cosanta le 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc). ), cé go bhfuil grúpaí slabhra taobh d'aimínaigéid cosanta le grúpaí cosanta aigéad-labile. Baintear an grúpa Fmoc trí úsáid a bhaint as 20% piperidine i DMF, agus ag deireadh na sintéise, baintear grúpaí cosanta taobhshlabhra agus naisc roisín peptide le 1%-95% TFA. Is é Fmoc SPPS an modh roghnaithe do shintéis peiptíde faoi láthair.

 

Bunphrionsabail Fmoc Sintéis Peiptíde Soladach-chéim

 

Roghnaigh Roisín

Na roisíní is forleithne a chuirtear i bhfeidhm i Fmoc SPPS lena n-áirítear 4-roisín alcóil alkoxybenzyl (Wang), 2-roisín clóiríd chlorotritile, roisín Rink Amide, Rink Amide-MBHA. Úsáidtear roisíní aimíde chun peiptídí a shintéisiú le amú teirminéil C atá riachtanach. Úsáidtear roisín Wang agus roisín 2-Cl Trt go coitianta chun peptide a shintéisiú le COOH saor ó theirminéil C riachtanach. Ach nuair a bhíonn Pro agus Gly ag ceannfort C an pheptíde mar an chéad aimínaigéad, níor cheart roisín Wang a úsáid mar gheall ar an mbaol foirmiú DKP (dikettopiperazine), 2-moltar Roisín Clóiríd Chlorotrityl le húsáid.

 

 

Aimínaigéid chosanta a cheangal le roisíní

Tá an chéad aimínaigéad Fmoc ceangailte le roisín tacaíochta dothuaslagtha trí nascóir aigéad-labile.

 

Díchosaint an ghrúpa cosanta -aimín

Baintear an grúpa cosanta sealadach Fmoc ag N-terminus an roisín peptidyl-trí chóireáil le tuaslagán de 20% piperidine i DMF. De ghnáth críochnaíonn an t-imoibriú seo laistigh de 10 go 20 nóiméad.

 

Céimeanna níocháin

Tar éis gach imoibriú ceimiceach, déantar céimeanna níocháin chun imoibrithe breise, seachtháirgí, agus móilíní neamh-imoibrithe a bhaint as an roisín. Cuidíonn sé seo le íonacht an tslabhra peptide atá ag fás a choinneáil.

 

Gníomhachtú agus cúpláil an aimínaigéad cosanta

Cuirtear an aimínaigéad cosanta atá ceangailte leis an roisín i ngníomh chun a imoibríocht a fheabhsú chun é a chúpláil leis an gcéad aimínaigéad eile sa seicheamh. I measc na ngníomhairí gníomhacha coitianta tá HOAt, HOBt, PyBOP, PyAOP, HBTU agus HATU. Is éard atá i gceist le cúpláil ná nasc peptide a fhoirmiú idir an aimínaigéad gníomhachtaithe agus an grúpa aimín den slabhra peptide atá ag fás. Úsáidtear tástáil Kaiser de ghnáth chun monatóireacht a dhéanamh ar iomláine na bhfrithghníomhartha cúplála.

 

Céimeanna níocháin

Cosúil le céimeanna níocháin níos luaithe, cinntíonn sé seo go mbaintear an iomarca imoibrithe agus seachtháirgí tar éis an imoibrithe cúplála.

 

Scoilteadh ó roisín agus deprotection na ngrúpaí cosanta slabhra taobh

Nuair a bheidh an t-ord peptide atá ag teastáil sintéiseithe ar an roisín, tá sé scoilte ón tacaíocht soladach ag baint úsáide as cocktail scoilteachta mar aigéad trifluoroacetic (TFA) ina bhfuil scavengers cosúil le thioanisole agus uisce. Ag an am céanna, baintear grúpaí cosanta slabhra taobh ar iarmhair aimínaigéad, rud a léiríonn an peptide atá díchosanta go hiomlán réidh le haghaidh íonú agus anailíse.